La extracción de ADN requiere una serie
de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la membrana
plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe
romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay
que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que
hacer que precipite en alcohol. La solución de lavavajillas y sal
ayudada por la acción de la licuadora es capaz de romper las membranas
plasmática y nuclear. El zumo de piña contiene un enzima proteasa, la bromelina,
que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar el
ADN. El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua
pero, cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la
interfase entre el alcohol y el agua.
MATERIAL
· Sal común (NaCl)
·
Detergente
·
Zumo de piña natural
·
Cucharilla
·
Batidora
·
Embudo y muselina
·
Tubo de ensayo
·
Palillo
·
Tijeras
PROCEDIMIENTO
1. Trocear 25g de
timo de cordero
2. Introducir los fragmentos en una batidora
3. Añadir 2g de sal
4. Añadir 100ml de agua
5. Triturar durante un minuto con potencia media
6. Filtrar con un embudo con una capa de muselina
7. Separar en partes de 5 ml
8. Añadir 25ml de agua y una cucharada más de sal a la alícuota de 5ml
9. Añadir dos cucharadas de lavavajillas y mezclar muy suavemente con una varilla
10. Dejar reposar durante 10 min
11. Preparar un zumo de piña natural (pelar,trocear,batir) y filtrarlo con el embudo y la capa de muselina
12. Añadir a la mezcla 7 cucharadas del zumo de piña y mezclar suavemente
13. Dejar reposar durante 10 min, mezclando con suavidad de vez en cuando
14. Pasar una porción del extracto a un tubo de vidrio de boca ancha evitando que caigan grumos
15. Dejar caer un volumen igual de alcohol frío, muy poco a poco, deslizando por la pared del tubo para que el alcohol flote sobre el extracto
16. Dejar reposar el tubo en posición vertical durante unos minutos y observar lo que ocurre en la interfase
17. Intentar recoger las fibras de DNA que aparecen con la ayuda de un palillo
2. Introducir los fragmentos en una batidora
3. Añadir 2g de sal
4. Añadir 100ml de agua
5. Triturar durante un minuto con potencia media
6. Filtrar con un embudo con una capa de muselina
7. Separar en partes de 5 ml
8. Añadir 25ml de agua y una cucharada más de sal a la alícuota de 5ml
9. Añadir dos cucharadas de lavavajillas y mezclar muy suavemente con una varilla
10. Dejar reposar durante 10 min
11. Preparar un zumo de piña natural (pelar,trocear,batir) y filtrarlo con el embudo y la capa de muselina
12. Añadir a la mezcla 7 cucharadas del zumo de piña y mezclar suavemente
13. Dejar reposar durante 10 min, mezclando con suavidad de vez en cuando
14. Pasar una porción del extracto a un tubo de vidrio de boca ancha evitando que caigan grumos
15. Dejar caer un volumen igual de alcohol frío, muy poco a poco, deslizando por la pared del tubo para que el alcohol flote sobre el extracto
16. Dejar reposar el tubo en posición vertical durante unos minutos y observar lo que ocurre en la interfase
17. Intentar recoger las fibras de DNA que aparecen con la ayuda de un palillo
OBSERVACIONES
Después de
realizar todo el procedimiento, pudimos observar como en la interfase del tubo
de ensayo se observaba una especie de mucosa alargada (DNA). Además intentamos recoger
las fibras del ADN con el palillo pero resultaba muy difícil ya que se
resbalaba y se rompía con facilidad.
Estas imágenes
adjuntas, son lo que pudimos ver en la interfase.
Clara Cerveró
Gracias por el aporte.
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